赛默飞NanoDrop One光度计的使用方法相对简便,以下是详细步骤:
一、准备阶段
1.仪器检查与连接
确保NanoDrop One光度计已正确连接到电源,并打开设备。
检查设备是否已正确连接到计算机(如适用),并确保相关软件(如NanoDrop软件)已安装并可正常运行。
2.样品准备
确保样品充分混匀,并根据需要适当稀释。高浓度样品可能超出仪器的线性检测范围,影响结果准确性。
使用无绒擦拭纸或实验室无尘纸轻轻擦拭测量平台(光纤)和上臂,确保无灰尘和残留物,避免影响测量结果。
二、操作步骤
1.选择测量模式
在计算机上的NanoDrop软件中,或直接在仪器的触摸屏上,选择需要的测量模式,如核酸(DNA、RNA)模式、蛋白质模式或其他特殊分析模式。
2.进行空白检测
将1~2微升的空白液体(如去离子水或缓冲液,需与样品溶剂一致)滴在光纤平台上。
放下上臂,确保液体被夹在上臂和测量平台之间。
点击软件中的“Blank”按钮或仪器上的相应按钮,进行空白检测以消除背景吸光度。
3.样品检测
用移液器取1~2微升样品,准确滴加到光纤平台的中心位置。
轻轻放下上臂,使样品处于光纤间的检测区域。
点击软件中的“Measure”按钮或仪器上的相应按钮,开始样品的测量过程。
测量结果会立即显示在软件界面上或仪器的屏幕上,包括吸光度(如A260、A280)和核酸或蛋白质的浓度值。如果是核酸测量,还会提供A260/A280和A260/A230的比值,用于评估样品的纯度。
三、结束与数据保存
1.结束实验
完成检测样品后,点击结束实验按钮。
2.数据保存与导出
NanoDrop软件通常提供了数据保存和导出功能。在测量完成后,用户可以选择保存数据到电脑中,或导出为Excel或其他格式的文件,便于后续分析和记录。
四、注意事项与维护
1.样品准备
样品应充分混匀,避免引入气泡。
如果样品浓度过高,应先稀释后再进行测量。
2.平台清洁
每次测量完成后,都应使用无绒擦拭纸或实验室无尘纸轻轻擦拭光纤平台和上臂,确保样品残留被清除,避免交叉污染。
如果有残留难以清除,可以使用70%乙醇或去离子水湿润擦拭纸进行清洁。
3.设备校准
建议定期使用标准溶液进行校准,以确保设备的测量精度。
4.日常维护
长期使用后,应定期对光纤平台进行清洁,防止样品残留物影响读数。
遵循厂家提供的维护指南可以延长设备使用寿命。
遵循以上步骤和注意事项,可以确保赛默飞NanoDrop One光度计的正确使用和有效维护,从而获得准确的实验结果。